产品目录

本试剂盒采用排除绝大多数实验室常规试剂的干扰的光学定量方法，它可以去除离子、非离子、两性去污剂、还原试剂、螯合试剂、Tris、糖、两性电解质、尿素、硫尿、盐酸胍等变性试剂，对于在Laemmeli Buffer等蛋白质上样缓冲液，2D Sample Extraction Buffer、高浓度的β-巯基乙醇(<1.5M)和脂质体中的蛋白质也可以定量。蛋白质量在0.5～50μg之间有良好的线性关系，需要的样品体积在1～50μL，特殊的沉淀试剂可以去除掉绝大多数干扰物质，被沉淀的蛋白质与含有铜的碱性物质相混合，未与蛋白质相结合铜在被还原为一价后与特定的生色试剂反应，产生特定的480nm吸收波长。所以随着蛋白质的浓度增加，未与蛋白质结合铜相应减少，这样特定的吸收波长的吸收值与溶液中的蛋白质浓度成反比，这种蛋白质定量方法不受氨基酸副链和蛋白质的种类的影响，本试剂盒可以做250次微量定量。

• 整个实验过程大约需要45min左右。
  
• 定量过程不受到非蛋白的多种干扰因素影响。
  
• 定量范围在0.5～50μg。
  
• 适合对各种生物的细胞或组织裂解液或2D电泳细胞裂解液中样品的直接进行定量。

• 分光光度法
  
  • 将取12支1.5mL的离心管，每两管为相同编号，分别在不同编号的离心管中加入0、4、8、12、20、25μL的蛋白质标准溶液，相同编号的离心管加入相同体积的蛋白质标准溶液。
    
  • 另取两支1.5mL的离心管，分别加入同样体积的1～50μL的待定量的蛋白质样品溶液。
    
    • 所加入的待定量的蛋白质样品溶液的最大体积为50μL，每支管中的蛋白质的最大量不要超过50μg，如果蛋白质样品的浓度较高，可以用双蒸水做适当稀释。
      
    • 如果待定量的蛋白质样品溶液中没有干扰物质存在，可以继续直接跳到步骤7进行实验。
  • 在以上14支试管中加入0.5mL沉淀试剂一，涡旋振荡30sec，在室温下放置2～3min。
    
  • 加入0.5mL沉淀试剂二，涡旋振荡30sec。
    
  • 转置冷冻离心机中于4℃，13000rpm(15000g)离心15min，这样会在试管的底部形成可见或不可见的紧密的蛋白质沉淀团块。
    
  • 将试管从离心机上取出，用枪头尽可能去除上清，保留沉淀，再将试管倒置在滤纸上，以便让试管中的残液流干。
    
    • 离心结束后，立即去除上清，否则时间久了，蛋白质团块会慢慢扩散到溶液中同时变小；离心时在试管上做记号，以便了解蛋白质团块在离心结束后，其在试管底部的方位，使得在转移上清的过程中，枪头很方便地不接触到蛋白质团块，减少蛋白质的损失。
      
    • 第6步要尽量去除上清，保留沉淀，再将试管倒置在滤纸上，以便让试管中的残液流干。也可以第6步操作结束后，再重复步骤3～6(用0.5mL沉淀试剂一和0.5mL沉淀试剂二)，清洗一次。
  • 加入100μL的铜试剂和400μL的双蒸水，涡旋振荡30sec，直到蛋白质沉淀团块完全溶解。
    
  • 再加入1mL的生色试剂混合液，颠倒试管混匀几次。
    
  • 室温下放置15～20min，在10min内，将A480波长处的吸收值测量完毕。
    
  • 以相同编号的离心管吸收值的平均值为纵坐标，对应的BSA蛋白量为横坐标，在坐标纸上或用Microsoft Excel软件中绘制BSA标准曲线。
    
    • 在做标准曲线时，不要将空白样品在A480波长处的吸收值扣除，因为空白样品在A480波长处的吸收值是最大的。
  • 根据标准曲线和待定量的蛋白质样品溶液的A480吸收值的平均值，计算出所对应的经过稀释后的蛋白质样品溶液的浓度，从而得出蛋白质样品溶液的原始浓度。
• 酶标板法
  
  • 前面操作方法1～8与分光光度法相同。
    
  • 转移1.5mL离心管中200～250μL混合液到相应的96孔酶标板的各孔中，在10min内，将A480波长处的吸收值测量完毕。
    
  • 其余步骤与与分光光度法后续步骤10相同，根据标准曲线和稀释倍数计算出蛋白质样品溶液的原始浓度。

• 如果标准曲线线性关系不明显，或线性关系不成直线。必须保证第5步有足够的离心速度和时间，以保证蛋白质能够完全沉淀。
  
• 所加的蛋白质的量必须在定量范围内，否则需要将样品做适当稀释。
  
• 蛋白质浓度定量偏低，一般是蛋白在第6步有损失。如果残留液难以吸取干净，可以保留20μL左右的残留液，加入乙醇：乙醚为1:1(v/v)的溶液1mL，洗涤沉淀。然后重复第5步和第6步实验。
  
• 沉淀试剂一具有腐蚀性和刺激性，请在通风橱中使用，并做好防护措施。
  
• 产品中的保存条件及有效期均以未开封情况下计算，为了防止产品与空气接触发生化学反应影响产品性能，将未使用完毕的组分按存储要求保存同时建议开封后的组分尽快使用完毕。
  
• 该产品中包含配套的BSA标准蛋白溶液，由于BSA易受环境，人为，温度等因素的影响造成失效，建议收到货后将BSA溶液分成多个小管进行冷冻保存，避免反复冻融造成BSA降解失活。
  
• 本试剂盒只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果，概不承担责任。